Hva Protein Nedbør Teknikker Brukes For Konsentrasjon og Rydde opp?

Spørsmål:

Hvilke nedbørsteknikker brukes til konsentrasjon og opprydding?

Proteinmannen Sier:

Proteinutfelling er prosessen der protein separeres fra eventuelle ekstra forurensninger som kan blandes med det. Det er en viktig del av nedstrøms behandling og kan gjøres med en rekke forskjellige teknikker. Mens det finnes en rekke forskjellige metoder for nedbør, Er De to mest populære Saltindusert Nedbør («Salting Ut») med ammoniumsulfat eller Isoeletrisk Nedbør med trikloreddiksyre.

Saltindusert Nedbør Med Ammoniumsulfat

prosessen med å «salte ut» et protein kan forekomme med en rekke forskjellige typer nøytrale salter, men ammoniumsulfat er langt den vanligste. Ved salting ut interagerer proteinet med saltet i motsetning til vannet, noe som fører til mindre interaksjon mellom vannet og proteinets solvasjonslag, noe som igjen fører til at flere hydrofobe flekker blir utsatt og for å oppmuntre disse flekkene til å samhandle med hverandre. Dette fører proteinene til utfelling.

Ammoniumsulfat er det foretrukne saltet fordi Det er høyt På Hofmeister-serien og har en høy oppløselighet. Det kan enten tilsettes til proteinoppløsningen, eller løsningen kan helles på en målt mengde ammoniumsulfat. Prosessen tar omtrent en halv time til en time før blandingen sendes til sentrifugen.

Isoeletrisk Nedbør Med Trikloreddiksyre

Nedbør kan oppnås ved å variere ph i mediet. Ved lave pH-er har proteiner en netto positiv ladning fordi amidet får et ekstra proton. Ved høye pH-er har de en netto negativ ladning på grunn av karboksyl på proteinryggraden som mister protonen. Ved deres pI-verdi har et protein ingen nettoladning. Dette fører til redusert oppløselighet fordi proteinet ikke klarer å interagere med mediet og vil da falle ut av løsningen.

Trikloreddiksyre (TCA) brukes ofte til nedbør fordi det ser gode resultater med en relativt lav konsentrasjon (vanligvis rundt ~15%). Bruk AV TCA eksponerer enda mer av proteinene hydrofobe struktur, noe som resulterer i økt nedbør, men kjører en svært høy risiko for å forlate gjenværende protein ikke-funksjonelle. PÅ grunn AV DETTE brukes TCA vanligvis bare når et aktivt protein ikke er nødvendig, som med en massespektrometri analyse. I tillegg, fordi du bruker en syre, må ekstra trinn tas når utfellingsprosessen er fullført, nemlig å legge til en base eller vaske av gjenværende protein med aceton.

Organiske løsningsmidler, som aceton, brukes også til proteinutfelling, ofte i forbindelse med TCA. De organiske løsningsmidlene reduserer den dielektriske konstanten til et organisk løsningsmiddel som resulterer i tap av oppløselighet og dermed utfelling.

Bilde Av: Kitkor