Imunodeficientní Myši Pro studie rakoviny: který kmen hostitele bych měl použít?

je to přímočará otázka s nepříliš přímočarou odpovědí!

čtyři třídy imunodeficientních myší

JAX distribuuje řadu imunodeficientních kmenů, které lze rozdělit do čtyř hlavních kategorií:

* „nahé“ myši
* „Scid“ myši
* „hadrové“ myši
• „multigenní“ imunodeficitní myši vyššího řádu

článek Jax Notes důkladně popisuje tyto nabídky. Stručně řečeno,“ nahé „myši jsou homozygotní pro mutaci Foxn1nu nebo „nahé“. Foxn1 kóduje transkripční faktor potřebný pro vývoj vlasových folikulů i brzlíku. Při jeho nepřítomnosti jsou myši bezsrsté i atymické. Protože se brzlík nevytváří, není místo pro CD4+ a CD8+ T buňky, aby se diferencovaly a zraly, takže nahé homozygoty T buňky jsou nedostatečné.

“ Scid “ myši jsou homozygotní pro mutaci Prkdcscid. Gen Prkdc kóduje katalytickou podjednotku DNA-dependentní proteinkinázy, která je nutná pro opravu DNA a pro utěsnění dvouvláknových zlomů DNA, ke kterým dochází během somatické rekombinace genů receptoru T buněk (TCR) a imunoglobulinu (ig). Při absenci proteinu Prkdc se geny TCR a Ig nemohou přeskupit, což vede k myším, které mají nedostatek T I B buněk.

myši s nedostatkem hadrů jsou myši, které nedokážou exprimovat funkční proteiny Rag1 nebo Rag2. Stejně jako gen Prkdc jsou Rag1 i Rag2 vyžadovány pro somatickou rekombinaci genů TCR a Ig a absence obou genů vede k nedostatku T A B buněk. Myši, které nesou mutace Rag1tm1Mom nebo Rag2tm1. 1Cgn, mají velmi podobné, ne-li identické fenotypy.

konečně,“ vyšší řád, multigenní “ imunodeficientní myši jsou konstruovány buď z prkdcscid nebo myší s deficitem Rag a nesou další mutace zvyšující imunodeficienci. Mezi tyto myši patří naše NSG a NRG myši, které nesou specifickou mutaci v gama podjednotce receptoru interleukinu 2 (Il2rgtm1Wjl)v kombinaci s Prkdcscid a Rag1tm1Mom. Tyto myši mají nedostatek B, T a NK buněk. Navíc, protože oba mají genetické pozadí NOD/ShiLtJ, mají hemolytický nedostatek komplementu a nesou alely, které nepříznivě ovlivňují funkce makrofágů a dendritických buněk.

výběr hostitele nádorových buněk

výběr nejlepšího hostitele pro studii nádoru z těchto kmenů závisí na několika faktorech, včetně:

• jaký typ nádoru chcete vytvořit-např. zavedenou buněčnou linii, nádor přenášený krví nebo pomalu rostoucí primární nádor?
• kde nádor— např. subkutánně nebo ortotopicky-obsadíte a jak zhodnotíte jeho růst?
• jak dlouho potřebujete, aby myši zůstaly naroubovány?

přizpůsobení vašich odpovědí na tyto otázky charakteristikám myší popsaným v komplexní imunodeficitní sadě by mělo značně zúžit výběr hostitele.

nahé myši

nahé myši obecně vytvářejí ideální hostitele pro zavedené, rychle rostoucí linie nádorových buněk. Protože jsou bezsrsté, nemusí být oholeny nebo depilovány, aby vyhodnotily růst podkožního nádoru. Bezsrstý fenotyp také velmi usnadňuje sledování fluorescenčně značených buněk zobrazováním celého těla. Protože však nahé myši stále mají B buňky a robustní NK buněčné odpovědi, nejsou vhodnými hostiteli pro rakoviny přenášené krví, jako jsou leukémie nebo lymfomy. Jsou také chudými hostiteli pomalu rostoucích lidských nebo myších primárních nádorových buněk nebo heterogenních fragmentů nádoru.

Jax udržuje živé kolonie tří různých kmenů nude:nu / J (002019) inbrední myši, B6-nahé (000819) kongenické myši a J: NU (007850) outbrední akty. Být inbrední a kongenní, respektive NU / J A B6-akty jsou geneticky homogenní. Proto pravděpodobně podporují konzistentnější růst nádoru. Naproti tomu outbrední akty J:NU mohou vykazovat variabilnější růst nádoru, protože jsou geneticky heterogenní. Jejich outbrední povaha je však činí energičtějšími než akty NU/J nebo B6, takže mohou být schopni odolat invazivnějším nebo závažnějším experimentálním manipulacím. Protože myši NU/J I J:NU jsou albino, mohou být upřednostňovány pro sledování růstu nádoru zobrazováním celého těla.

Scid a myši s deficitem hadru

pokud se chystáte zapojit pomalu rostoucí, zavedené primární buněčné linie nebo rakoviny přenášené krví, scid a myši s deficitem hadru jsou lepší volbou než nahé myši. Oba mají nedostatek T A B buněk, a proto jsou imunokompromitovanější než akty. Nádory, které rostou pouze tvrdohlavě u nahých myší, pravděpodobně poroste robustněji V jednom z těchto kmenů.

ze dvou modelů jsou SCID pravděpodobně široce používány jako hostitelé nádorových buněk, pravděpodobně proto, že jsou již dlouhou dobu – od 1990 – a jsou široce dostupné od většiny prodejců myší. Jsou však náchylní k „netěsnosti“, což znamená, že se u nich mohou vyvinout nízké hladiny sérových imunoglobulinů (Igs). Tato netěsnost je častější u myší B6- (001913) a BALB/c scid (001803), méně časté u myší C3H scid (001131) a nejméně časté u myší NOD – scid (001303). Není jasné, jaký vliv má tato netěsnost na vhodnost těchto myší jako hostitelů nádorových buněk. Studie ukazují, že repertoár antigenů, které „děravé“ Igs rozpoznávají, je malý a data spojující netěsnost s odmítnutím tkáně nebo špatným růstem nádoru jsou slabá.

ze čtyř výše uvedených kmenů scid myši nod scid obvykle podporují vyšší úrovně štěpení. U myší nod scid se však mohou vyvinout tymické lymfomy, které omezují jejich průměrnou délku života na přibližně 30 týdnů. Proto myši nod scid nemusí být vhodnými hostiteli pro dlouhodobé studie štěpení.

protože se protein Prkdc podílí na opravě DNA, mutanty scid jsou citlivé na záření, a proto nemusí být vhodnými hostiteli, pokud je třeba je ozářit. Na druhé straně, protože Rag proteiny nejsou zapojeny do opravy DNA, myši s nedostatkem hadrů jsou odolné vůči záření. Navíc nejsou “ děravé.“Myši s nedostatkem hadrů byly občas označovány jako“ netěsné SCID.“

protože ani scid, ani myši s nedostatkem hadrů nejsou bezsrsté, musí být oholeny nebo depilovány, aby sledovaly růst podkožního nádoru.

imunodeficientní myši vyššího řádu: preferované hostitele pro lidské primární nádory

pokud se chystáte zapojit lidské a myší primární nádory, budete pravděpodobně potřebovat větší stupeň imunodeficience než u myší s nedostatkem nahoty, scid nebo hadru. V průběhu let bylo vyrobeno několik kmenů, které kombinují další mutace s nedostatkem scid nebo Rag, aby dále potlačily imunitní odpovědi myši. Patří mezi ně scid béžová(Lystbg), nod scid/(B2-mikroglobulin (B2m)-deficientní (002570) a nod Rag1/perforin 1 (Prf1)-null (004848) myši. Nedávno byly vyvinuty myši NSG a NRG, které kombinují mutace scid a Rag1 s deficitem gama řetězce receptoru interleukinu 2 (Il2rg), které podporují robustnější růst nádoru po štěpení než dřívější myši s dvojitou mutací. Navíc lidské primární nádory roubované do NSG myší si zachovávají více svých nativních cytostrukturních a stromálních charakteristik, než když jsou roubovány do myší BALB/c scid. Bezkonkurenční imunitní nedostatečnost NSG myší z nich učinila preferovaného hostitele pro stanovení a pasážování lidských primárních nádorů v našem zdroji Xenograftu odvozeném od pacienta (PDX), který nyní obsahuje více než 200 zavedených modelů s nízkým průchodem.

jedinou hlavní nevýhodou při použití NSG nebo NRG jako hostitelů nádorů je to, že myši mají vlasy a musí být oholeny nebo depilovány, aby sledovaly růst podkožních nádorů. Dále, alespoň v jedné studii, NSG myši byly příliš tolerantní: melanomové buňky, které normálně nejsou tumorigenní u lidského pacienta, tvořily nádory u této myši. V této studii bylo zjištěno, že hostitelé nod scid věrně rekapitulují malignity normálně pozorované u lidských pacientů s rakovinou.

Obecně platí, že čím závažněji imunokompromitovaný hostitel myši, tím je pravděpodobnější, že nádorová buněčná linie nebo primární nádor poroste. V mnoha případech však méně imunokompromitovaný hostitel podpoří adekvátní růst nádoru. Volba imunodeficientního hostitele pak do značné míry závisí na původu tumorigenních buněk a jejich typické rychlosti růstu při transplantaci do hostitele. Další pokyny při výběru imunodeficientního hostitele pro jakýkoli druh studie štěpení nádoru, kontaktujte naši skupinu technických informačních služeb.